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本试剂盒采用分光光度法以亚铁嗪为底物对样本中的铁进行定量，用于血清、血浆、组织中铁含量研究检测。

在酸性介质中与转铁蛋白结合的血清铁从转铁蛋白中解离出来，其他样品中的铁在酸性介质环境下也会被解离，再被还原剂还原为Fe2+，后者与亚铁嗪生成紫红色化合物，通过分光光度计检测562nm处吸光度，适用于检测血清、血浆、组织等样品中的铁含量。上述检测方法属于直接检测法，应设血清空白，纠正血清本身的色度，根据公式计算出铁含量。

• 在140μmol/L以下线性关系良好，甘油三脂≤3.39mmol/L，胆红素≤171μmol/L，对本法基本无干扰。
  
• 批内差异CV≤3.1%；批间差异CV≤2.6%。

• 溶血样本对检测有干扰，尽量避免采用溶血样本。
  
• 如果样品浓度过高，应用蒸馏水稀释后重测，结果乘以稀释倍数。
  
• 实验过程中用到的水，不可用普通的蒸馏水，尽量采用高纯度的去离子水。
  
• 玻璃器材需要10%的盐酸浸泡24h，取出后用去离子水冲洗后才可以使用。
  
• 避免与铁器接触，以防铁污染。
  
• 标准品呈色24h稳定，血清呈色30min内稳定，随着时间的延长，颜色会慢慢加深，应在1h内比色完毕。
  
• 试剂开封后请尽快使用，以防影响后续实验效果。
  
• 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
  
• 本试剂盒仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。

• 制备样品(选做)：
  
  • 浆、血清样品：血浆、血清按照常规方法制备，-20℃冻存，用于Fe的检测。
    
  • 细胞或组织样品：取恰当细胞或组织进行匀浆，低速离心取上清，-20℃冻存，用于Fe的检测。
    
  • 高浓度样品：如果样品中含有较高浓度的Fe，可以使用ddH2O稀释，不宜使用普通蒸馏水稀释。
    
  • 选做：样品准备完毕后可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度，以便于后续计算单位蛋白重量组织或细胞内的Fe含量。
• 制备铁标准工作液：取适量的铁标准(100μg/mL)，按铁标准(100μg/mL)∶铁标准稀释液=1∶49的比例配制铁标准(2μg/mL)，即为铁标准工作液；4℃避光保存3个月有效。
  
• Fe加样：选用经稀盐酸处理及去离子水清洁的干燥试管或者一次性无菌聚乙烯离心管，按照下表设置空白管、标准管、测定管，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡。如果样品中的铁离子含量过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定，样品的检测最好能设置平行管。
  

  加入物(mL)	空白管	标准管	测定管
  ddH2O	0.45	—	—
  铁标准(2μg/mL)	—	0.45	—
  待测样品	—	—	0.45
  Fe Assay Buffer	1.2	1.2	1.2
  混匀，于562nm处，以空白管调零，读取测定管的吸光度(A 血清空白)。
  亚铁嗪显色液	0.05	0.05	0.05

• Fe测定：混匀，室温静置或37℃孵育，以空白管调零，分光光度计562nm处检测标准管、测定管的吸光度(即为A _标准，A _测定)，1h内比色完毕。